Vergleich zweier PCR-Nachweisverfahren zur Früherkennung einer Aspergillusinfektion bei Hochrisikopatienten:

Abstract

Zwei verschiedene Extraktions- und PCR-Verfahren wurden in dieser Studie miteinander verglichen. Eine konventionelle manuelle DNA-Extraktion im Vergleich zur automatischen MagNa Pure DNA-Extraktion und eine konventionelle PCR-ELISA im Vergleich zur LightCycler-Methode wurden an 325 Patientenproben untersucht. Die Blutproben stammten von 55 immunsupprimierten Hochrisikopatienten einer KMT-Station. Von den 55 Patienten hatten 2 Patienten nach den EORTC-Kriterien eine proven, 3 eine probable und 19 eine possible Aspergillose. Bei den restlichen 31 Patienten gab es keinen Anhalt für eine Infektion mit Aspergillen. Unabhängig von der Extraktionsmethode konnten wir mit dem LightCycler® keine positiven Ergebnisse erzielen. Bei dem PCR-ELISA Detektionsverfahren wurden 77 Proben mit der MagNa Pure und 62 Proben mit der manuellen DNA-Extraktion positiv. Davon waren jeweils 34 bzw. 30 Proben falsch positiv. 2 der Proben von den gesicherten Aspergillosefällen wurden mit der Mag Na Pure Methode entdeckt, dagegen keine mit der Handextraktion. Bei den wahrscheinlichen Aspergillosefällen wurden alle 3 Proben mit der Handextraktion und 2 bei der automatischen Methode positiv. Es gab 9 Übereinstimmungen bei den positiven Ergebnissen. Insgesamt zeigte die Studie, dass beide Methoden aufgrund der geringen Spezifität und Sensitivität zur Diagnostik einer invasiven Aspergillose nicht geeignet sind.

The study focuses on the comparison of two different extraction and PCR procedures. A total of 325 blood samples were examined to compare a conventional manual DNA extraction with an automatic MagNa Pure DNA extraction procedure as well as a conventional PCR-ELISA with the LightCycler®-method. The blood samples were taken from 55 immunosuppressed high-risk patients of a bone marrow transplantation unit. According to the EORTC-criteria 2 proven, 3 probable and 19 possible aspergillosis were found out of 55 patients. The remaining 31 patients showed no indication of an aspergillus infection. No positive results could be achieved with the LightCycler® irrespective of any extraction method used. The PCR-ELISA detection procedure in combination with the MagNa Pure produced 77 positive samples and in combination with the manual DNA-extraction 62 positive samples, including however 34 false positive samples with the MagNa Pure and and 30 with the manual extraction method. Two of the saved aspergillosis case samples were detected by means of the MagNa Pure method whereas none could be detected manually. With respect to the probable aspergillosis cases 3 positive samples were obtained manually and 2 positive samples using the automatic method. Nine corresponding results were found within the positive samples. Overall, the study demonstrates that both methods used are inappropriate due to their low specificity and sensitivity for an invasive aspergillosis diagnosis.