Über T-Zellen-Alloreaktivität

Abstract

Alloreaktive ab-T-Zellen erkennen fremde MHC Moleküle, wobei die Erkennung durch Determinanten des MHC-Moleküls und/oder des Peptides vermittelt wird. Ein Teil der peptidabhängigen alloreaktiven T-Zellen, die allorestringierten T-Zellen, ist spezifisch für ein bestimmtes Peptid. Hier wurde Peptidbibliotheken dazu benutzt, den Einfluss engverwandter selbst-HLA-Moleküle auf das Repertoire an alloreaktiven T-Zellen zu untersuchen. Wir beobachteten keinen erhöhten Anteil an peptidspezifischen CTL im alloreaktiven Repertoire von HLA-A*0205-positiven Spendern verglichen mit HLA-A2-negativen Spendern. Ein Vergleich der alloreaktiven T-Zellantwort zweier Spender mit ähnlichem HLA-Haplotyp zeigte, daß das allorestringierte T-Zellrepertoire starke individuelle Unterschiede aufweist. In vitro eine Unterscheidung zwischen der Erkennung der MHC-Struktur und peptidspezifischer Erkennung ist schwierig. In dieser Promotionsarbeit wurde zum ersten Mal gezeigt, daß allorestringierte T-Zellen in der Lage sind, spezifisch HLA-Peptid-Tetramerkomplexe zu binden. Es wurde gezeigt, daß fluoreszierende HLA-Peptid-Tetramerkomplexe dazu geeignet sind, allorestringierte CTL gegen ein bestimmtes Peptid zu isolieren. Weiterhin wurden mit Hilfe von HLA-Peptid-Tetramerkomplexen alloreaktive T-Zellen nachgewiesen, die eine peptidselektive Konformation des allo-MHC-Moleküls erkennen. gd T-Zellen erkennen, im Gegensatz zu ab T-Zellen, ein breites Antigen Spektrum. Vg9/Vd2 T-Zellen werden durch Phosphoantigene aktiviert. In dieser Promotionsarbeit wird der erste alloreaktive Vg9/Vd2 T-Zellklon beschrieben, der spezifisch ein HLA Klasse I-Molekül erkennt. Obwohl dieser Klon den Vg9/Vd2 TCR exprimiert, wurde erstaunlicherweise kein Aktivierung durch bakterielle Phosphoantigene beobachtet. Für gd T-Zellrezeptoren, die keine Disulfidbrücken aufweisen, ist daher eine Konformation wahrscheinlich, die die Erkennung von Molekülen der MHC Superfamilie erlaubt.

Alloreactive ab-T cells recognise framework or peptide-dependent determinants on foreign MHC molecules. Among peptide-dependent alloreactive T cells, a significant proportion is specific for one particular peptide presented by the allo-MHC molecule, the allorestricted T cells. We made use of peptide libraries to study the role of closely related self-HLA molecules on the shaping of the alloreactive T cell repertoire. We did not observe a bias towards peptide-specific CTLs in the alloreactive repertoire of HLA-A*0205 donors compared to HLA-A*02 negative donors. Comparison of the alloreactive T cell response between two donors having similar HLA haplotypes demonstrates that the allorestricted T cell repertoire is largely different between individuals. Allorestricted T cells specific for tumour associated antigens can be raised in vitro, however it is difficult to differentiate in vitro between framework and peptide-specific recognition. We provide the first evidence that allorestricted T cells can bind specifically HLA-peptide tetrameric complexes. We demonstrate that fluorescent HLA-peptide tetrameric complexes can be used for sorting and cloning of allorestricted CTLs specific against a peptide of interest. We also show by the mean of HLA-peptide tetramers the existence of peptide-selective alloreactive T cells that recognise a conformation on the allo-MHC. In contrast with ab T cells, gd T cells recognise a broad variety of antigens. Vg9/Vd2 T cell that represent the vast majority of gd T cells in the human periphery are activated by non-peptidic phosphoantigen. In this thesis, we describe the first alloreactive Vg9/Vd2 T cell clone specific for an HLA class I molecule. Although expressing the Vg9/Vd2 TCR, the B18 clone was not activated by bacterial phosphoantigen and does not express any known NK-receptors. Our results suggest that the particular conformation adapted by non-disulphide-linked gd TCRs is more prone to react with molecules of the MHC superfamily.