Vergleich von konventionellen PCR Methoden mit den Aspergillus fumigatus spezifischen Primern TS2 und AfLC2 und dem Panfungal-Primer für die Aspergillus fumigatus Diagnostik bei Risikopatienten

Abstract

Invasive Aspergillose ist eine schwierig zu diagnostizierende Erkrankung mit steigender Inzidensrate und hoher Mortalität. Drei unterschiedliche konventionelle PCR-Verfahren wurden in der vorliegenden Arbeit miteinander verglichen. Die verwendeten Primer waren der Panfugal-Primer, der TS2- und AfLC2-Primer. Die Panfugal-PCR wurde anhand einer etablierten ELISA-Untersuchung analysiert. Die TS2-PCR- und AfLC2-PCR-Verfahren wurden mittels Gelelektrophorese evaluiert. Insgesamt wurden 100 Blutproben untersucht. Die Proben stammen von 25 Hochrisikopatienten, davon 14 Frauen und 11 Männer. Alle Patienten erhielten eine Knochenmarkstransplantation. Nach den EORTC-Richtlinien hatten von den 25 Patienten 22 eine mögliche Aspergillose, zwei eine wahrscheinliche Aspergillose und einer eine gesicherte Aspergillose. Sämtliche Blutproben waren in einer vorherigen Studie mit dem Panfugal-Primer positiv auf Aspergillus-DNA getestet worden. Dieses Ergebnis konnte in der vorliegenden Studie mit gleichem Testvefahren nur für 39% der Blutproben reproduziert werden. Die TS2-PCR ergab für 39% der Proben ein positives Ergebnis. Die AfLC2-PCR ergab ausschließlich negative Ergebnisse. Proben des Patienten mit gesicherter Aspergillose wurden von der Panfugal-PCR erkannt, Patientenproben der wahrscheinlichen Aspergillose von der TS2-PCR. Spezifität und Sensitivität der unterschiedlichen PCR waren gering und nur z.T. reproduzierbar. Für die Evaluation im klinischen Gebrauch werden größere Patientenkollektive mit gesicherter und wahrscheinlicher Aspergillose benötigt.

Invasive aspergillosis is a disease of difficult diagnosis implicating high mortality and an increasing number of infection. This study focuses on the comparison of three different nested PCR procedures using the aspergillus specific primer TS2 and AfLC2 and the panfungal-primer. The panfungal-PCR was analyzed by an ELISA assay, both TS2-PCR and AfLC2-PCR by gel electrophoresis. 100 blood samples were taken from immunocompromised high risk patients subsequent to a bone marrow transplantation. According to the EORTC criteria 1 proven aspergillosis patient, 2 pobable and 22 possible were found out of 25 including 14 female and 11 male patients. All blood samples had been tested positive by the panfugal-PCR in previous studies. The present research work could reproduce this result in only 39% of all tested blood samples. A positive result could be obtained in 39% of all samples by means of a TS2-PCR assay. All blood samples remained negative for aspergillus DNA by conducting the AfLC2 PCR test. Proven aspergillosis samples were detected by the panfungal primer. Pobable aspergillosis samples were found positive by implementing the TS2 PCR procedure. The various PCR procedures showed low sensitivity and reproductivity of former results was only partly reached. Further clinical studies should be carried out including a larger number of patients with proven and probable aspergillosis to evaluate the clinical significance of the diagnostic use of PCR.