Quantitativer PCR-Nachweis zur Bestimmung der Expression von Zytokin-, Chemokin-, Toll-like Rezeptor- und Adapterprotein-Genen nach Stimulation von peripheren mononuklearen Blutzellen mit Lipopolysacchariden und Phythämagglutinin

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dc.contributor.advisor Einsele, H. de_DE
dc.contributor.author Sprenger, Falko David de_DE
dc.date.accessioned 2006-06-29 de_DE
dc.date.accessioned 2014-03-18T09:37:02Z
dc.date.available 2006-06-29 de_DE
dc.date.available 2014-03-18T09:37:02Z
dc.date.issued 2006 de_DE
dc.identifier.other 27578343X de_DE
dc.identifier.uri http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bsz:21-opus-23247 de_DE
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/10900/44825
dc.description.abstract In dieser Arbeit sollte untersucht werden, ob es nach Stimulation von humanen peripheren mononuklearen Blutzellen (PBMCs) mit Lipopolysacchariden (LPS) oder Phythämagglutinin (PHA) zu einer Veränderung der Expressionsrate von spezifischen Zytokin-, Chemokin-, TLR- und Adapterprotein- Genen gekommen ist. Hierbei wurde die Technik der real-time RT-PCR angewendet, die sich durch ihre leichte Durchführbarkeit, hohe Sensitivität, Spezifität und Reproduzierbarkeit auszeichnet. Die im Labor hergestellten Standardverdünnungsreihen zeigten eine Reproduzierbarkeit, die sich mit denen anderer real-time RT-PCR Assays aus der Literatur deckt. Des Weiteren konnte für alle untersuchten Zytokin-, Chemokin-, TLR- und Adapterprotein-Gene ein sehr hohes Detektionslimit erzielt werden (MyD88: 102; IL-15 und RANTES: 101; TLR3, IRAK1 und TRAF6: 100). Die verwendeten Hybridisierungssonden erlaubten außerdem eine hoch- spezifische PCR-Produkt Detektion, was durch die gelelektrophoretische Auftrennung der TRAF6 LightCycler-PCR-Produkte eindrücklich gezeigt werden konnte. Auch konnte gezeigt werden, dass mit dem in dieser Arbeit verwendeten PCR-Assay eine hohe Intra- und Inter-Reproduzierbarkeit erreicht werden kann. Auch war über einen Bereich von 6 Zehnerpotenzen die Linearität der Amplifikation gegeben. Nach LPS-Stimulation konnte gezeigt werden, dass MyD88, IRAK1 und TRAF6, die alle Schlüsselrollen beim LPS-induzierten Signalweg einnehmen, eine erhöhte Genexpressionsrate aufwiesen. IL-15, das bedeutend bei der antiviralen Immunantwort ist, RANTES und TLR3, welches für die Erkennung doppelsträngiger RNA von Viren verantwortlich ist, zeigten hingegen keinen erhöhten Expressionslevel. Es stellt sich jedoch als schwierig heraus, die Ergebnisse aus der Literatur mit den eigenen Ergebnissen zu vergleichen, da eigentlich nie die identischen Versuchsbedingungen (Art der stimulierten Zellen, Stimulationsdauer und Stärke des stimulierenden Agens) vorliegen und es deshalb zu unterschiedlichen Genexpressionen kommen kann. de_DE
dc.description.abstract In this dissertation the technique of real-time RT-PCR was used to show if there is a change of the gene expression of specific cytokines, chemokines, toll-like receptors and adapter proteins in LPS- and PHA-stimulated human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in comparison to non-stimulated PBMCs. The real-time RT-PCR is a rapid, standardized, sensitive, reproducible and accurate method for in vitro quantification of specific cDNA. The external standards were produced in our lab and showed a reproducibility, that can be compared with external standard reproducibility from other authors. A high detection limit could be achieved ( MyD88: 102, IL-15 and RANTES: 101; TLR3, IRAK1 and TRAF6: 100). With the hybridization probes a high specific PCR detection was achieved. This could be demonstrated in a gel electrophoretic assay with TRAF6- PCR products of all concentrations (106-101). The PCR assay permitted a high intra- and interreproducibility. The amplification was linear in a sector from 101-106. After stimulation with lipopolysaccharide the PBMC showed an increased expression level of MyD88, IRAK1 and TRAF6. All these mediators play a crucial role in the LPS induced pathway. LPS stimulation had no influence on the expression of IL-15, RANTES and TLR3, which play an important role in the antiviral immune response. All in all it is difficult to compare these results with the results from other authors, because of the different experimental conditions (type of stimulated cells, duration of stimulation, stimulant power). en
dc.language.iso de_DE de_DE
dc.publisher Universität Tübingen de_DE
dc.rights ubt-podok de_DE
dc.rights.uri http://tobias-lib.uni-tuebingen.de/doku/lic_mit_pod.php?la=de de_DE
dc.rights.uri http://tobias-lib.uni-tuebingen.de/doku/lic_mit_pod.php?la=en en
dc.subject.classification Lipopolysaccharide , Phythämagglutinin , Polymerase-Kettenreaktion de_DE
dc.subject.ddc 610 de_DE
dc.subject.other Genexpressionsrate , periphere mononukleare Blutzellen de_DE
dc.subject.other real-time polymerase chain reaction , gene expression , lipopolysaccharide, phytohaemagglutinin , peripheral blood mononuclear cells en
dc.title Quantitativer PCR-Nachweis zur Bestimmung der Expression von Zytokin-, Chemokin-, Toll-like Rezeptor- und Adapterprotein-Genen nach Stimulation von peripheren mononuklearen Blutzellen mit Lipopolysacchariden und Phythämagglutinin de_DE
dc.title Gene expression detection of cytokines, chemokines, toll-like receptors and adapter proteins in LPS- and PHA- stimulated PBMCs with quantitative real-time RT-PCR en
dc.type Dissertation de_DE
dcterms.dateAccepted 2004-06-01 de_DE
utue.publikation.fachbereich Sonstige de_DE
utue.publikation.fakultaet 4 Medizinische Fakultät de_DE
dcterms.DCMIType Text de_DE
utue.publikation.typ doctoralThesis de_DE
utue.opus.id 2324 de_DE
thesis.grantor 05/06 Medizinische Fakultät de_DE

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