Einfluss des Anthranilsäurederivats Glafeninhydrochlorid auf die Proliferation, klonogene Aktivität, den Zellzyklus und das Migrationsvermögen von humanen aortalen glatten Muskelzellen und Endothelzellen in vitro

Abstract

Das Ziel dieser Studie war es, den Einfluss von Glafeninhydrochlorid (einer nicht-steroidalen, antiinflammatorischen Substanz) auf die Proliferation, die klonogene Aktivität, den Zellzyklus, die Migration, den Zellaufbau und die extrazelluläre Synthese des Matrixproteins Tenascin bei humanen aortalen glatten Muskelzellen (haSMC) und humanen endothelialen Zellen (EC) in vitro zu untersuchen. HaSMC und EC wurden in Zellkulturflaschen ausgesät. Die Zellen wurden 4 Tage lang mit Glafeninhydrochlorid (10mM, 50 mM und 100 mM) behandelt. Die Hälfte der behandelten Gruppen wurde erneut mit Glafeninhydrochlorid inkubiert, die andere Hälfte erhielt Glafeninhydrochlorid-freies Kulturmedium; Wiederholung alle 4 Tage bis Tag 20. Wachstumskinetiken und klonogene Aktivitäten wurden erhoben. Die Zellzyklusverteilung wurde mittels FACS untersucht, das Migrationsvermögen ausgewertet und die Effekte auf die extrazelluläre Matrixsynthese mittels Immunfluoreszenz ausgewertet. Glafeninhydrochlorid inhibierte die Proliferation und klonogene Aktivität von haSMC und EC in einer konzentrationsabhängigen Weise. Ein G2-Phasenblock und eine Verminderung der G1-Phase wurden festgestellt. Das Migrationsvermögen der haSMC wurde dosisabhängig beeinflusst und die extrazelluläre Synthese des Matrixproteins Tenascin vermindert. Da Glafeninhydrochlorid das Potential besitzt, die Proliferation der haSMC vollständig zu supprimieren und teilweise deren Migration zu unterbinden, stellt es sich im Bereich der Restenoseforschung als eine interessante Substanz dar.

The aim of this study was to examine the effects of glafenine hydrochloride (a nonsteroidal anti-inflammatory drug) on proliferation, clonogenic activity, cell-cycle, migration, and the extracellular matrix protein tenascin of human aortic smooth muscle cells (haSMCs) and human endothelial cells (ECs) in vitro.HaSMCs and ECs were seeded in tissue culture flasks. The cells were treated for 4 days with glafenine hydrochloride (10 microM, 50 microM, 100 microM). Half of the treated groups were incubated again with glafenine hydrochloride, the other half received medium free of glafenine hydrochloride every 4 days until day 20. The growth kinetics and clonogenic activity were assessed. Cell cycle distribution was investigated by FACS, migratory ability was evaluated, and effects on extracellular matrix synthesis were assessed by immunofluorescence.Glafenine hydrochloride inhibited the proliferation and clonogenic activity of haSMCs and ECs in a dose-dependent manner. A block in the G2/M phase and a reduction in the G1 phase occurred. The migratory ability of haSMCs was impaired in a dose-dependent manner and the extracellular matrix protein tenascin was reduced. As glafenine hydrochloride has the ability to fully inhibit proliferation and to partially inhibit migration in haSMCs, it could be an interesting substance for further research in the field of restenosis therapy.