Funktionelle und pharmakologische Charakterisierung des humanen Natrium-/Carnitin-Cotransporters hOCTN2

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dc.contributor.advisor Lang, Florian de_DE
dc.contributor.author Lükewille, Ulrike de_DE
dc.date.accessioned 2002-12-16 de_DE
dc.date.accessioned 2014-03-18T09:33:24Z
dc.date.available 2002-12-16 de_DE
dc.date.available 2014-03-18T09:33:24Z
dc.date.issued 2002 de_DE
dc.identifier.other 104056347 de_DE
dc.identifier.uri http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bsz:21-opus-6558 de_DE
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/10900/44306
dc.description.abstract L-Carnitin ist notwendig für der Translokation langkettiger Fettsäuren über die innere Mitochondrienmembran und somit für die anschließende Energiegewinnung durch b-Oxidation. Carnitin selbst wird über den kürzlich klonierten plasmamembranständigen hochaffinen Na+/Carnitin-Cotransporter hOCTN2 in die Zelle transportiert. Dieser Transporter gehört zu der Familie der organischen Kationentransporter (OCT). Ziel der vorliegenden Arbeit war eine funktionelle und pharmakologische Charakterisierung von hOCTN2 mittels Two-Electrodes-Voltage-Clamp und Flux-Messungen an hOCTN2-injizierten Xenopus laevis Oozyten. Der L-Carnitintransport durch hOCTN2 war Na+-abhängig, elektrogen und sättigbar. Die Halbsättigungskonzentration für Natrium betrug 0.3 ± 0.1 mM bei -60 mV. Es zeigte sich eine leichte Stereospezifität für L-Carnitin mit einem Km-Wert von 4.9 ± 0.3 µM für L-Carnitin und einem Km-Wert von 98.3 ± 38.0 für D-Carnitin. Weiterhin wurde der Einfluß des extra- und intrazellulären pH-Wertes auf die L-Carnitin-induzierten Ströme untersucht. Es fand sich eine Abnahme der L-Carnitin-induzierten Ströme bei Azidifizierung des extrazellulären Mediums. Eine intrazelluläre Ansäuerung mit Bicarbonat bewirkte eine signifikante Hemmung des Carnitinstromes um 22.3 ± 4.5 Im Gegensatz zu anderen Mitgliedern der OCT-Familie scheint hOCTN2 also ein hochaffiner Na+/Carnitin-Cotransporter zu sein, ohne Beteiligung eines Symport- oder Antiportmechanismus für andere Kationen als Natrium. hOCTN2 zeigte nur kleine Ströme für klassische Substrate anderer OCTs wie Cholin oder TEA, während sich bei rOCT1 und hOCT2 keine Ströme durch Carnitin induzieren ließen. Der hOCTN2 vermittelte L-Carnitintransport ließ sich durch einige Pharmaka hemmen, die ein sekundäres Carnitinmangelsyndrom auslösen können. Die stärksten Hemmstoffe waren Emetin, Verapamil, Quinidin, Betain und Cystein. Das Antiepileptikum Valproinsäure zeigte keinen nennenswerten inhibitorischen Effekt, was auf einen anderen Hemmech de_DE
dc.description.abstract L-Carnitine is essential for the translocation of acyl-carnitine into the mitochondria for β-oxidation of long-chain fatty acids. It is taken up into the cells by the recently cloned Na+-driven carnitine organic cation transporter OCTN2. Here we expressed hOCTN2 in Xenopus laevis oocytes and investigated with two-electrode voltage-clamp and flux measurements its functional and pharmacological properties as a Na+-carnitine cotransporter. L-carnitine transport was electrogenic. The L-carnitine-induced currents were voltage and Na+ dependent, with half-maximal currents at 0.3 ± 0.1 mM Na+ at -60 mV. Furthermore, L-carnitine-induced currents were pH dependent, decreasing with acidification. In contrast to other members of the organic cation transporter family, hOCTN2 functions as a Na+ - coupled carnitine transporter. Carnitine transport was stereoselective, with an apparent Michaelis-Menten constant (Km) of 4.8 ± 0.3 μM for L-carnitine and 98.3 ± 38.0 μM for D-carnitine. The substrate specificity of hOCTN2 differs from rOCT-1 and hOCT-2 as hOCTN2 showed only small currents with classic OCT substrates such as choline or tetraethylammonium; by contrast hOCTN2 mediated transport of betaine. hOCTN2 was inhibited by several drugs known to induce secondary carnitine deficiency. Most potent blockers were the antibiotic emetine and the ion channel blockers quinidine and verapamil. The apparent IC50 for emetine was 4.2 ± 1.2 μM. The anticonvulsant valproic acid did not induce a significant inhibition of carnitine transport, to a different mode of action. In summary, hOCTN2 mediates electrogenic Na+-dependent stereoselective high-affinity transport of L-carnitine and Na. HOCTN2 displays transport properties distinct from other members of the OCT family and is directly inhibited by several substances known to induce systemic carnitine deficiency. en
dc.language.iso de_DE de_DE
dc.publisher Universität Tübingen de_DE
dc.rights ubt-podok de_DE
dc.rights.uri http://tobias-lib.uni-tuebingen.de/doku/lic_mit_pod.php?la=de de_DE
dc.rights.uri http://tobias-lib.uni-tuebingen.de/doku/lic_mit_pod.php?la=en en
dc.subject.classification Carnitin , Carnitinmangel de_DE
dc.subject.ddc 610 de_DE
dc.subject.other Menschlicher Natrium-abhängiger Kationentransporter (hOCTN2) , Carnitintransport , sekundäres Carnitinmangelsyndrom , pharmakologische Hemmung de_DE
dc.subject.other Human sodium-driven organic cation transporter 2 (hOCTN2) , carnitine transport , pharmacology , secondary carnitine deficiency en
dc.title Funktionelle und pharmakologische Charakterisierung des humanen Natrium-/Carnitin-Cotransporters hOCTN2 de_DE
dc.title Functional and pharmacological characterization of human Na+-carnitine cotransporter hOCTN2 en
dc.type Dissertation de_DE
dc.date.updated 2010-01-22 de_DE
dcterms.dateAccepted 2002-11-28 de_DE
utue.publikation.fachbereich Sonstige de_DE
utue.publikation.fakultaet 4 Medizinische Fakultät de_DE
dcterms.DCMIType Text de_DE
utue.publikation.typ doctoralThesis de_DE
utue.opus.id 655 de_DE
thesis.grantor 05/06 Medizinische Fakultät de_DE

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