Etablierung von Organoiden aus Zellen des Spülurins von Patientinnen und Patienten mit Blasentumoren

Abstract

Im Rahmen dieser Arbeit wurde ein Protokoll entwickelt, mit dem aus dem Spülurin von Menschen mit Blasentumoren Organoide in Langzeitkultur kultiviert werden konnten. Insgesamt wurden 58 Gewebeproben von PatientInnen mit Blasentumoren aufgearbeitet, 35 Proben aus Spülurin, 23 Proben aus korrespondierenden soliden Tumoren. Außerdem wurden 2 unterschiedliche Trägermaterialien getestet, wobei sich GrowDex® gegenüber dem etablierten Basalmembranextrakt (BME) als unterlegen erwies. Immunfluoreszenzfärbungen wurden durchgeführt, die in fast allen Proben für eine Differenzierung der Sphäroide als maligne urotheliale Zellen sprachen. Im Vergleich zu den soliden Tumorproben zeigten die Kulturen aus Spülurin ein besseres Sphäroidwachstum in späteren Passagen, wobei nur eine Organoid-Langzeitkultur gewonnen werden konnte (UCO#33). Außerdem wurden die Sphäroide auch bezüglich des Sphäroidwachstums und der geschätzten Zunahme der Zellmasse in den Zellkulturen verglichen, wobei kein Nachteil der Kultur von Organoiden aus Spülurin festgestellt werden konnte. Damit ist die Effizienz der Gewinnung von Blasentumor-Organoiden aus Spülurinproben in dieser Arbeit zwar der Effizienz anderer, in Vorarbeiten beschriebener, Methoden unterlegen, zeigte aber innerhalb der hier beschriebenen Versuche keinen Nachteil gegenüber der Kultur aus soliden Tumorproben. UCO#33 zeigte als einzige Kultur aus Spülurin eine Ko-Expression von CD24 und CD44, was die mögliche Rolle von CD24 als Prädiktor für ein besseres Organoidwachstum weiter stützt. Im Vergleich der Organoidkulturen mit den Ursprungstumoren konnte eine veränderte Ausprägung einzelner Proteine beobachtet werden In dieser Studie konnten keine Prädiktoren für PatientInnen definiert werden. Dennoch sind Organoiden aus Spülurin eine interessante und neue Möglichkeit für die Forschung und personalisierte Medizin. Die Kulturmethodik sollte dafür aber weiter optimiert und verbessert werden.