Charakterisierung von Rezeptor-beschichteten Nanopartikeln und deren Einfluss auf die in vitro dependente Thrombusentstehung

Abstract

Klassische antithrombotische Präparate führen aufgrund ihrer systemischen Wirkungsweise zu einem konstitutionell erhöhten Blutungsrisiko. Innovative Forschungsansätze fokussieren sich daher auf die gezielte antithrombotische Therapie. Im Hinblick darauf wurden im Rahmen meiner Doktorarbeit mit dimerischem GPVI-Fc und dem bifunktionellen Fusionsprotein GPVI-CD39 funktionalisierte, polymere Nanopartikel entwickelt, charakterisiert und auf deren in vitro Beeinflussung der Thrombusentstehung hin, mit BSA-beschichteten Nanopartikeln als Kontrolle, untersucht. Die Charakterisierung wurde mittels Elektronen- und Rasterkraftmikroskopie sowie durchflusszytometrischen Analysen durchgeführt. Mithilfe von Versuchen am Lichttransmissionsaggregometer erfolgte zudem die Analyse der Thrombozytenaggregation. Perfusionsversuche ermöglichten abschließend die Objektivierung der in vitro Thrombogenese. Hierbei wiesen NP-GPVI und NP- GPVI-CD39 eine spezifische Oberflächenbeschichtung auf, die Fluoreszenzeigenschaften hingegen erwiesen sich als übereinstimmend. Beide funktionalisierten Nanopartikel hemmen die Thrombozytenaggregation, jedoch lediglich bifunktionelles NP-GPVI-CD39 inhibiert die ADP-induzierte Thrombozytenaggregation. Die Thrombogenese zeigt sich bei variablen Scherraten durch NP-GPVI und insbesondere NP-GPVI-CD39 gehemmt. Zusammenfassend erzielen die funktionalisierten Nanopartikel NP-GPVI und insbesondere bifunktionelles NP-GPVI-CD39 eine signifikante Hemmung der in vitro Thrombusentstehung. Somit bestätigt sich der Nanopartikel-vermittelte antithrombotische Effekt von GPVI-Fc und dem Fusionsprotein GPVI-CD39 sowie der additive Nutzen der Ektonukleotidase CD39. Abschließend treten NP- GPVI und insbesondere bifunktionelles NP-GPVI-CD39 als vielversprechende, neuartige Therapieansätze im Rahmen der gezielten, antithrombotischen Therapie hervor.